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定性测定ELISA试剂盒显色与室温的关系

点击次数:420 发布时间:2016-11-24e}

ELISA试剂盒时间一般不需要严格控制,有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔适当缩短或延长反应时间,及时判断。此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素。在一定时间内,阴性孔可保持无色,而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。在定量测定中,加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。

TMB受光照的影响不大,ELISA试剂盒可在室温中置于操作台上,边反应观察结果。OPD底物显色一般在室外温或37 ℃反应20-30分钟后即不再加深,再延长反应时间,可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色,显色反应应避光进行,显色反应结束时加入终止液终止反应。OPD产物用硫酸终止后,显色由橙黄色转向棕黄色。但为保证实验结果的稳定性,宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后,约40分钟显色达顶峰,随即逐渐减弱,至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种,叠氮钠和十二烷基硫酸钠(SDS)等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝色维持较长时间(12-24小时)不褪,是目视判断的良好终止剂。

此外,ELISA试剂盒各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色,此时可用特定的波长(450 nm)测读吸光值。比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体,ELISA试剂盒然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中。以软板为载体的试验,需先将板置于标准96孔的座架中,才可进行比色。zui好在加底物液显色前,先将软板边缘剪净,这样,此板就可完全平妥坐入座架中。

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